本发明涉及一种甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，其中该脂质体注射剂由特定重量配比的甲磺酸多拉司琼、大豆卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油和胆固醇制成。本发明的脂质体注射剂具有良好的制剂稳定性，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率；本发明提高了制剂产品的质量，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，减少了毒副作用，并且制法简单，适合于工业化大生产。
1.一种甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，其中甲磺酸多拉司琼脂质体由以下重量配比的成份制成：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>其中，大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比为3:1-5:1；磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之比为1:2-2:1。
2.根据权利要求1所述的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，其中甲磺酸多拉司琼脂质体由以下重量配比的成份制成：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>其中，大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比为3:1-5:1；磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之比为1:2-2:1。
3.根据权利要求1或2所述的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，其中大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比为3:1-4:1。
4.根据权利要求1或2所述的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之比为1:1。
5.一种制备权利要求1-4中任一项所述的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂的方法，该方法包括以下步骤：（1）将大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油和胆固醇溶于80%乙醇水溶液中，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到类脂膜；（2）将甲磺酸多拉司琼溶于注射用水中，在无菌条件下，加入到(1)中所得的类脂膜中混合，在57℃下保温振摇，直至类脂膜均匀分散到溶液中；（3）超声30min，定容搅拌均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，即得甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂。技术领域
本发明涉及一种甲磺酸多拉司琼的新型注射剂及其制法，具体涉及一种甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂及其制法，属于药物制剂技术领域。
背景技术
甲磺酸多拉司琼(Dolasetronxa0mesylate)为类白色结晶性粉末，易溶于水和丙二醇，微溶于乙醇，相对分子质量：420.48，分子式：C₂₀H₂₄N₂O₆S，其化学名称为1H-吲哚-3-羧酸，八氢-3-氧-2,6-亚甲基-2H-喹嗪-8-（2α，6α，8α，9αβ）-单甲烷磺酸盐；化学结构式如下：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>甲磺酸多拉司琼最早由Hoechstxa0Marionxa0Roussel公司研发，后来由Sanofi－Aventis公司接手开发为药，1997年在澳大利亚首次上市，商品名anzement。1998年6月，在美国上市，1999年在法国，意大利，2000年在芬兰（商品名AnZemet）南非（商品名zamanon）上市。2003年以aneme在德国和英国上市。是人工合成的含有假石榴碱骨架的一种高特异活性和选择性5-羟色胺(5-HT3)受体拮抗剂，在临床上广泛用于治疗偏头痛及类似病症，以及治疗由于手术或由具有细胞毒性的药物所引起的呕吐。本品在血浆和肝脏中迅速代谢成氢化多拉司琼，此活性代谢产物在肝脏中经CYPxa02D6和CYPxa03A进一步代谢，而后随尿液和粪便排出。在药物载体输送系统中，微乳、微球、纳米粒、脂质体、药质体等亚微粒的研究已经成为药物新剂型研究中非常活跃的领域。将药物包封于这些亚微粒中可以改变药物在体内的分布，增加药物在靶器官的分布量，从而提高疗效，减轻毒副作用。在靶向给药系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性。脂质体（Liposome）最初是由英国学者Bangham和Standlish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层都是均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4nm。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。脂质体可分为多室脂质体和单室脂质体。单室脂质体又分为小单室脂质体和大单室脂质体。小单室脂质体为球形，尺寸一般为20-50纳米；大单室脂质体的尺寸为微米数量级。1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体，主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主药被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。
发明内容
为了形成品质优良的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，重要的是寻找能与甲磺酸多拉司琼良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，以及寻找能使脂质体形成稳定注射剂的赋形剂成分。为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和实现，发现特定重量配比的甲磺酸多拉司琼、大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油和胆固醇能制成甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，其中，作为药物活性成分的甲磺酸多拉司琼的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，与现有技术中的甲磺酸多拉司琼注射剂相比，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。本发明的目的在于提供一种甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，其中甲磺酸多拉司琼脂质体由以下重量配比的成份制成：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>其中，大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比为3∶1-5∶1，磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之比为1∶2-2∶1。本发明的另一目的在于提供上述甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂的制备方法，该方法包括以下步骤：（1）将大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油和胆固醇溶于80％乙醇水溶液中，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到类脂膜；（2）将甲磺酸多拉司琼溶于注射用水中，在无菌条件下，加入到(1)中所得的类脂膜中混合，在57℃下保温振摇，直至类脂膜均匀分散到溶液中；（3）超声30min，定容搅拌均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，即得甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂。根据本发明提供的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂通过选择适当的原料成分并采用合适的制备方法获得，其中脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高，所得甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂的品质优良。
附图说明
图1示出甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂的血药浓度-时间曲线。其中：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="313"/>
具体实施方式
以下对本发明进行详细描述，本发明的特点和优点会随着这些描述而变得更为清楚。根据本发明的一方面，提供一种甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，其中甲磺酸多拉司琼脂质体由以下重量配比的成份制成：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>其中，大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比为3∶1-5∶1，磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之比为1∶2-2∶1。优选地，提供一种甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，其中甲磺酸多拉司琼脂质体由以下重量配比的成份制成：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>其中，大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比为3∶1-5∶1，磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之比为1∶2-2∶1。更优选地，大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比为3∶1-4∶1；磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之比为1∶1。在本发明中，作为药物活性成分的甲磺酸多拉司琼，其易溶于水。针对甲磺酸多拉司琼的特点，本发明人通过研究发现，大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油的组合特别适于作为基础磷脂成膜材料，通过同时它们与胆固醇结合，能够得到包封率高、稳定性高的脂质体注射液。当使用其他磷脂时，难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性、和渗漏率等性质劣化。在本发明的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂中，相对于1重量份的甲磺酸多拉司琼而言，大豆卵磷脂的用量为3-15重量份。如果大豆卵磷脂的用量低于3重量份，则形成的脂质体的稳定性会大幅度降低；反之，如果大豆卵磷脂的用量高于15重量份，则作为药物活性成分的甲磺酸多拉司琼的包封率也会随之下降，注射剂的品质以及疗效降低。在本发明的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂中，相对于1重量份的甲磺酸多拉司琼而言，磷脂酰乙醇胺的用量为1-3重量份，磷脂酰甘油的用量为1-3重量份。如果磷脂酰乙醇胺的用量低于1重量份，或者磷脂酰甘油的用量低于1重量份，则形成的脂质体的稳定性和包封率会明显降低；如果磷脂酰乙醇胺的用量高于3重量份，或者磷脂酰甘油的用量高于3重量份，则作为药物活性成分的甲磺酸多拉司琼的包封率也会随之下降，注射剂的品质以及疗效降低。在本发明的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂中，磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之比为1∶2-2∶1。如果磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之比不在此范围内，则所形成的脂质体的稳定性不足，注射剂的治疗效果差。为此的原因可能在于适当重量配比的磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油能与大豆卵磷脂有效组合作为基础膜材，适当重量配比的磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油的电性赋予所得形注射剂中脂质体以良好的稳定性，不过这仅是可能性的推测，并不受限于此。在本发明的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂中，胆固醇用于调节脂质体的膜稳定性。胆固醇（cholesterol，Ch）是一种双亲性分子，与大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油相结合，阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇掺入大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油的双层结构中，类似于“缓冲剂”一样起到调节膜结构“流动性”的作用。当低于相变温度时，胆固醇可以使膜减少有序排列，增加流动性；当高于相变温度时，胆固醇可以增加膜的有序排列，从而降低膜的流动性。胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。在本发明的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂中，胆固醇的用量为1-6重量份。如果胆固醇的用量低于1重量份，所得脂质体的稳定性明显降低；如果胆固醇的用量高于6重量份，则作为药物活性成分的甲磺酸多拉司琼的包封率也会随之下降，注射剂的品质以及疗效降低。在本发明的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂中，大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比为3∶1-5∶1。当大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比在此范围内时，能形成稳定的甲磺酸多拉司琼脂质体。当大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比高于5∶1时，膜稳定性降低，甲磺酸多拉司琼易于渗漏；当大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比低于3∶1时，脂质体膜流动性过高，被包裹在脂质体内的甲磺酸多拉司琼易于释放。此外，研究发现，当大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油重量之和与胆固醇之间的重量比为3∶1-4∶1时，所形成的脂质体毒性最低。在本发明中，当使用上述特定量的甲磺酸多拉司琼、大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油和胆固醇时，可以得到品质优良的甲磺酸多拉司琼脂质体，其包封率和稳定性都很高，粒径均一，毒性低，生物利用度高。根据本发明的另一方面，提供上述甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂的制备方法，该方法包括以下步骤：（1）将大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油和胆固醇溶于80％乙醇水溶液中，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到类脂膜；（2）将甲磺酸多拉司琼溶于注射用水中，在无菌条件下，加入到(1)中所得的类脂膜中混合，在57℃下保温振摇，直至类脂膜均匀分散到溶液中；（3）超声30min，定容搅拌均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，即得甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂。本发明的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂的规格为1ml:12.5mg或5ml:100mg（注射剂体积：甲磺酸多拉司琼重量）。在本发明中，通过选择合适原料成分、采用合适的制备工艺，所得甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂品质优良，其中脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。实施例以下通过示例性具体实例进一步描述本发明。不过，这些示例性实例仅是说明性的，并不对本发明的范围构成限制。实施例1甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂的制备所用原料如下：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>制备过程如下：（1）将大豆卵磷脂100g、磷脂酰乙醇胺12.5g、磷脂酰甘油12.5g和胆固醇25g溶于1500ml的80％乙醇水溶液中，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到类脂膜；（2）将12.5g甲磺酸多拉司琼溶于150ml注射用水中，无菌条件下，加入到上述所得类脂膜中混合，57℃保温振摇，直至类脂膜均匀分散到溶液中；（3）超声30min，加注射用水定容至1000ml，搅拌均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，灌装1ml/支，即得1000支甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂。实施例2甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂的制备所用原料如下：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>制备过程如下：（1）将大豆卵磷脂1000g、磷脂酰乙醇胺300g、磷脂酰甘油200g、胆固醇500g溶于20000ml的80％乙醇水溶液中，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到类脂膜；（2）将100g甲磺酸多拉司琼溶于1500ml注射用水中，无菌条件下，加入到上述所得类脂膜中混合，57℃保温振摇，直至类脂膜均匀分散到溶液中；（3）超声30min，加注射用水定容至5000ml，搅拌均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，灌装5ml/支，即得1000支甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂。实施例3甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂的制备所用原料如下：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>制备过程如下：（1）将大豆卵磷脂1000g、磷脂酰乙醇胺300g、磷脂酰甘油300g、胆固醇400g溶于20000ml的80％乙醇水溶液中，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到类脂膜；（2）将100g甲磺酸多拉司琼溶于1500ml注射用水中，无菌条件下，加入到上述所得类脂膜中混合，57℃保温振摇，直至类脂膜均匀分散到溶液中；（3）超声30min，加注射用水定容至5000ml，搅拌均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，灌装5ml/支，即得1000支甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂。对比例1-3分别采用与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的成分分别制成甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂：表1对比例1-2中所用成分成分
对比例1
对比例2
对比例3
甲磺酸多拉司琼
12.5g
100g
100g
大豆卵磷脂
/
1600g
1000g
磷脂酰肌醇
12.5g
/
50g
磷脂酰甘油
12.5g
/
50g
氢化大豆磷脂
100g
/
/
胆固醇
/
700g
400g
吐温80
25g
/
/
试验例1脂质体粒径的测定在室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3中的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，置于Submicronxa0Particlexa0Sizerxa0Modelxa0370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。表2脂质体粒径检测结果编号
平均粒径
外观
实施例1
241.4nm
球状，均匀规则
对比例1
477.5nm
不均匀不规则，杂乱
实施例2
236.3nm
球状，均匀规则
对比例2
458.4nm
不均匀不规则，杂乱
实施例3
243.3nm
球状，均匀规则
对比例3
461.7nm
不均匀不规则，杂乱
从表2可知，实施例1-3制得的脂质体粒粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂质体粒径不均匀，形状不定，大小不具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-3中所得注射剂中的甲磺酸多拉司琼脂质体的外观及其平均粒径明显优于对比例1-3中所得注射剂中的甲磺酸多拉司琼脂质体。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得甲磺酸多拉司琼脂质体的外观劣于本发明，平均粒径大出很多。试验例2包封率的测定将实施例1-3和对比例1-3中制备的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂以5000r/min的转速高速离心，离心20分钟，取上清液，用丙二醇水超声溶解，HPLC法测甲磺酸多拉司琼含量，计算包封率，结果示于下表3中。表3包封率测定结果编号
实施例1
对比例1
实施例2
对比例2
实施例3
对比例3
包封率
87.7%
50.1%
88.3%
54.0%
87.3%
51.5%
由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。试验例3稳定性考察将本发明实施例1-3和对比例1-3制备的样品和上市的甲磺酸多拉司琼注射液（批号：20120210，辽宁海思科制药有限公司，生产地址：辽宁省兴城市曹庄工业园区）分别置于高温40℃、相对湿度75%的条件下6个月，进行加速试验考察，结果示于下表4中。表4加速试验结果ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="685"/>ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>由表4可知，加速6月时，对比例及上市制剂含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。试验例4渗漏率试验取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果示于下表5中。表5渗漏率试验结果ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-3中制备的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂渗漏率变化不大，而对比例1-3中制备的注射剂渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂具有更高的稳定性。试验例5血药浓度的测定将30只大鼠随机分组，每组分别注射给药实施例1-3及对比例1-3中制备的注射剂，以及市售（批号：20120210，辽宁海思科制药有限公司，生产地址：辽宁省兴城市曹庄工业园区），规格为1ml：12.5mg甲磺酸多拉司琼注射剂。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、12h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-3中制备的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂、对比例1-3中制备的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂和市售注射用甲磺酸多拉司琼的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。由图1可知，实施例1-3与对比例1-3中制备的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂和市售甲磺酸多拉司琼注射剂相比，本发明实施例1-3中制备的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂具有以下优点：体内的消除速度慢，体循环中分布时间延长，达到缓释效果，生物利用度提高。工业实用性本发明提供的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂，甲磺酸多拉司琼脂质体具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，因这些均落入本发明的保护范围内。